domingo, noviembre 12, 2006

Contajes celulares (II)

Ayer nos quedamos en que gracias al hematocrito podiamos hacernos una idea de la proporción de células que habia en nuestro fluido. Pero para medir el número exacto de ellas, el método mas sencillo es la Cámara de Neubauer.


Una camara de Neubauer no es mas que un portaobjetos de microscopio, mas grueso y ligeramente modificado.

Tiene grabadas con diamante en su parte central, dos cuadrículas microscópicas, de 3x3 cuadrados. Cada cuadrado mide 1mm2, y está dividido a su vez en otra cuadrícula de 4x4 cuadrados, cada uno de los cuales mide, por tanto, 0,25mm de lado y 0,o625mm2 de superficie.¿Me seguís hasta aquí?.

El cuadrado central de nuestra cuadrícula grande (3x3) es la excepción, pues está dividido en 5x5, y con cada uno de estos cuadritos dividido a su vez. (Mirando el dibujo se entiende mejor)


Ademas de ésto, existen unos canales de drenaje del líquido sobrante, y están preparados para que al colocar un cubre sobre ellos, el espacio existente entre la cuadrícula y el cubre sea de 0,1 mm, con lo que nos podemos aprovechar del fenómeno de capilaridad para llenar nuestra cámara de líquido.

Y lo demas, es de barrio sésamo: Una superficie de 1mm2, con una altura de 0,1mm comprende un volumen de 0,1mm3, o lo que es lo mismo, 0,0001 cm3, que es lo mismo que decir mililitros. (recordad que en volúmenes, las unidades van de 3 en 3 ceros). Si contamos las células que hay en uno de los cuadrados de 1 mm, podemos extrapolar la cantidad de células por mililitro que tenemos en dicho fluido.

Vamos a la vida real, como pueden pasar muchas cosas que hagan que nuestro contaje no sea representativo, contaremos los cuatro cuadrados de 1mm de las cuatro esquinas, y sacaremos una media aritmética del número de células encontradas en los mismos.

Además, la concentración de células en la sangre es tan alta, que es necesario diluir a una concentración conocida la muestra, antes del contaje, y luego multiplicar el número de células por el factor de dilución que hayamos utilizado.Utilizamos la Pipeta de Thoma, o el sistema Unopette, que son métodos que permiten hacer las diluciones que necesitamos (1/10 y 1/100) Si conocemos la histología de la sangre, sabemos que los leucocitos son mucho menores en número (del orden de miles) que los eritrocitos(del órden de millones). Para contar estos últimos, ademas de hacer una dilución mayor de la muestra,utilizamos la subdivision del cuadrado central, de la cual contamos los cuatro cuadrados de las esquinas y el central. Sacamos la media aritmética, multiplicamos x 25 cuadrados en la cuadrícula y obtenemos el número de eritrocitos en 0,1 mm3, procediendo despues de la misma forma que para los leucocitos.

O para las algas unicelulares o los espermatozooides. Aqui la clave está en saber predecir ligeramente la concentración de células que nos vamos a encontrar, para poder hacer una dilución que ni nos sature la cuadrícula, ni nos deje un número tan escaso de células que el contaje no sea representativo.

Lo demas, es tener paciencia y buena vista. Es importante tener una regla para no contar dos veces la misma célula cuando éstas se situan en las lineas que delimitan la cuadrícula. Yo utilizo la de la "L" porque me resulta facil de recordar, cada cuadro tiene las células que contenga, mas las que se situen en el eje izquierdo e inferior (en el dibujo, solo marcados los de la diagonal para que se vea) y asi cubrir toda la cuadrícula. También es importante que la pauta de lectura sea ordenada y sistemática, como nos indica la flecha azul.

El contaje en nuestro ejemplo, seria de 4+4+4+3+2+3+3+2+2+4+3+4+3+3+4+2=50 células. Contaríamos los 3 restantes y sacariamos media.

Pero hacer esto en cada análisis de sangre que se hace sería muy costoso tanto en mano de obra como en instalaciones. El próximo dia veremos como se han actualizado estos métodos.

15 comentarios:

Ñita dijo...

No le daba la gana a blogspot de colgarme la ultima imagen,pero gracias a Nieva he podido solucionarlo antes de acostarme.
Disfrutenlo :)

Nieva dijo...

Bueno... ya has visto que lo de la imagen ha sido una tontería, y para la próxima ya sabes lo que hacer :)

Me ha resultado muy interesante la Cámara de Neubauer, pero ufff, qué paciencia y ojo hay que tener para hacer eso... casi prefiero el método de ayer, aunque sea mucho menos exacto, jejeje :) (además, tenía centrifugadora, que siempre son divertidas xD)

Espero que los avances en estos métodos a los que te refieres al final de la entrada sean igual de interesantes, y menos latosos de llevar a cabo :P :)

Un abrazo! :)

P.D.: Jo... yo quiero mi primera letra del nombre mayúscula... no puedo? :( ... jejeje, en fin.. qué se le va a hacer, cosas de blogger supongo, pero un nombre propio escrito con minúscula se me hace muy raro... :)

Ñita dijo...

La primera letra de tu nombre está con mayúscula....¿o_O?

Nieva dijo...

Vaya... pues tienes toda la razón.. si copio y pego mi nombre del "nieva said...", donde lo pego sale con mayúscula... pero cuando veo los comentarios en Blogger, me lo saca en minúscula (o sea, que el tipo de letra tiene iguales las mayúsculas y las minúsculas) He aquí la prueba :P :)

Tendré que aguantarme entonces... tampoco pasa nada :)

pipistrellum dijo...

Y los espermastocides que se mueven, como se cuentan?
Se congelan?

Illuminatus dijo...

Sólo tres palabras: citómetro de flujo. Ese chisme cabrón si que te resuelve la vida.

Tori dijo...

no sé a vosotros, pero a mí me entran ganas de hacer sudokus...

Teillu dijo...

Sinceramente, esperaba muchísimo más de algo con un nombre tan ampuloso como, tachán tachán, la Cámara de Neubauer!!! (oh, ooh, exclama el público... :D).

En el fondo es lo mismo que hacemos para contar dinero en moneda: hacer grupitos para no descontarnos; sólo que los grupitos ya vienen predeterminados con la retícula... Igual es una imagen reduccionista, o igual es una astuta simplificación divulgativa de Ñita...

No sé de cuántos capítulos consta la saga de los contajes celulares, pero espero ver pronto alguna maquinita a lo CSI, de ésas de meterle un botecito lleno de bichitos y que te los cuente ella solita... :D

Ñita dijo...

Teillu, esa es la gracia de los aparatos y técnicas de laboratorio: Hay mucho mas de trabajo duro, y aplicación de principios sencillos, que de maquinitas mágicas.
De todos modos, espero que el citómetro de flujo te decepcione un poco menos :P

Ñita dijo...

Perdon, Pi, se me habia pasado tu pregunta. Los espermatozooides se fijan (matan) antes de contarlos. No hace falta congelar, son muy sensibles a los cambios de concentraciones del medio...

Illuminatus dijo...

Teillu, aunque te parezca mentira, todo este tipo de chorradas a nivel tecnológico de ábaco se enseñan con espíritu de capacitar para trabajar en condiciones de escasos recursos, como en paises del tercer mundo o, los dioses nos protejan, de un presunto holocausto termonuclear.

Anónimo dijo...

Vi esto, y me pensé en tu blog.
http://www.novaciencia.com/2006/03/30/crean-el-neurochip/

Teillu dijo...

Ñita, Illuminatus...

El método me parece estupendo, cuanto más simple sea una máquina, mejor funcionará, de ello no cabe duda!

Tan sólo que, tal vez siendo un poco chovinista, el nombre de "cámara de neubauer" me sonara, vulgo lego, a algo más sofisticado... no preguntes porqué... No quise desmerecer el método, ni el trabajo de laboratorio.

No encuentro una chorrada el hacer asequibles métodos de trabajo, de laboratorio, de cultivo, o lo que sea, a gentes que no disponen de nuestros mismos medios. Es más fácil hacer llegar un concepto, una idea, que su formalización matérica... Enseña a pescar, no la pesca.

Después de leído el post, incluso yo me veo con fuerzas de pillar el parallex, un par de acetatos, y montar mi propia cámara de neubauer casera... :D 100% fidedigno, claro está... jeje

Un saludo, Illuminatus, Ñita!

Julian dijo...

porfavor si alguien me puede ayudar con una consulta se lo agradeceria infinitamente...
necesito saber por que el factor de dilucion de la camara de neubauer es de 10000 para el conteo en las zonas exteriores si alguien me puede mandar la repsuesta a mi correo mil gracias de antemano

juliancarg648@hotmail.com

consulta de la univeridad

Cristian dijo...

Me gusta mucho la tecnología y sobre todo cuando ingresa a nivel de la ciencia porque creo que puede ayudarla mucho. Me interesa conseguir distintos productos ya sea que ayuden a la ciencia o sea simplemente cosas tecnológicas. Por eso estoy a gusto con las camaras reflex que he comprado